Kit de detecção de ácido nucleico do novo coronavírus (SARS-Cov-2)

New Couronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit

(Fluminérioscent RT-PCR Probe Method) Product Manual

【PRoduct name 】Kit de detecção de ácido nucleico do novo coronavírus (SARS-Cov-2) (método de sonda fluorescente RT-PCR)

【Packaging specse eucations 】25 testes/kit

【Intended usidade】

Este kit é utilizado para a detecção qualitativa de ácido nucleico do novo coronavírus em esfregaços nasofaríngeos, esfregaços orofaríngeos (garganta), esfregaços nasais anteriores, esfregaços do corneto médio, lavagens nasais e aspirados nasais de indivíduos suspeitos de COVID19 pelo seu prestador de cuidados de saúde. A detecção dos genes ORF1ab e N do novo coronavírus pode ser utilizada para diagnóstico auxiliar e monitoramento epidemiológico da infecção pelo novo coronavírus.

【Principles of the proçadure 】

Este kit foi projetado para sondas TaqMan específicas e primers específicos projetados para as sequências dos genes ORF1ab e N do novo coronavírus (SARS-Cov-2). A solução de reação PCR contém 3 conjuntos de primers específicos e sondas fluorescentes para detecção específica de alvos, e um conjunto adicional de primers específicos e sondas fluorescentes é usado como controle padrão interno do kit para detecção de genes endógenos de manutenção.

O princípio do teste é que a sonda fluorescente específica é digerida e degradada pela atividade exonuclease da enzima Taq na reação de PCR, de modo que o grupo fluorescente repórter e o grupo fluorescente extinto sejam separados, de modo que o sistema de monitoramento de fluorescência possa receber um fluorescente sinal e, em seguida, através do efeito de enriquecimento da amplificação por PCR, o sinal de fluorescência da sonda atinge um valor limite definido - valor Ct (limiar do ciclo). No caso de não haver amplicon alvo, o grupo repórter da sonda está próximo do grupo de extinção. Neste momento, ocorre a transferência de energia de ressonância de fluorescência, e a fluorescência do grupo repórter é extinta pelo grupo de extinção, de modo que o sinal fluorescente não pode ser detectado pelo instrumento de PCR fluorescente.

Para monitorar o uso dos reagentes durante o teste, o kit é equipado com controles positivos e negativos: o controle positivo contém o plasmídeo recombinante do local alvo e o controle negativo é água destilada, que é utilizada para monitorar a poluição ambiental. Recomenda-se definir um controle positivo e um controle negativo simultaneamente durante o teste.

【Main components 】

Observação：(1) Os componentes em kits de lote diferentes não podem ser misturados ou trocados.

(2) Prepare seu próprio reagente: Kit de extração de ácido nucleico.

【Storage condissoons e expiration date 】

For BST-SARS-25:Transporte e armazene a -20±5℃ por um longo período.

For BST-SARS-DR-25:Transporte à temperatura ambiente. Armazene a -20±5℃ por um longo período.

Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento. O período de validade está provisoriamente definido para 12 meses.

Consulte o rótulo para saber a data de fabricação e uso.

Após a primeira abertura, o reagente pode ser armazenado a -20±5°C por no máximo 1 mês ou até o final do período do reagente, a data que ocorrer primeiro, para evitar ciclos repetidos de congelamento e descongelamento, e o número de congelamentos do reagente -os ciclos de descongelamento não devem exceder 6 vezes.

【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.

【Sample requirements 】

1.Tipo de amostra aplicável: Solução de ácido nucleico extraída.

2.Armazenamento e transporte de amostras: Armazene a -20±5℃por 6 meses. Congele e descongele as amostras no máximo 6 vezes.

【THusaing method】

1.Nucleic acid extraction

Selecione um kit de extração de ácido nucleico adequado para extrair o ácido nucleico viral e siga as instruções do kit correspondente. Recomenda-se a utilização de um kit de extração e purificação de ácido nucleico produzido pela Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. ou um kit de purificação de ácido nucleico equivalente.

2.  Rcadation reagent preparation

2.1 For BST-SARS-25:

(1) Remova a mistura SARS-Cov-2 e a mistura enzimática, derreta completamente à temperatura ambiente, misture bem pelo dispositivo Vortex e depois centrifugue brevemente.

(2) 16,5uL de mistura enzimática foram adicionados a 358,5uL de mistura SARS-Cov-2 e misturados completamente para obter a solução de reação mista.

(3) Prepare um tubo octal de PCR limpo de 0,2 mL e marque-o com 15uL da solução de reação mista acima por poço.

(4) Adicione 15 μL de solução purificada de ácido nucleico, o controle positivo e o controle negativo e cubra cuidadosamente a tampa do tubo octal.

(5) Misture bem invertendo de cabeça para baixo e centrifugue rapidamente para concentrar o líquido no fundo do tubo.

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